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REDVET. Revista electrónica de Veterinaria. ISSN: 1695-7504
2009 Vol. 10, Nº 8

REDVET Rev. electrón. vet. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet - http://revista.veterinaria.org
Vol. 10, Nº 8, Agosto/2009 – http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n080809.html

Consideraciones prácticas acerca de la calidad del semen
de conejos aplicado en estudios de toxicología de la
fertilidad (Practice considerations about the semen quality of
rabbits for applied in fertility toxicology study).

Arencibia Arrebola Daniel Francisco: Centro Nacional de
Investigaciones Científicas (CNIC), Avenida 25 y 158, Cubanacán,
Playa, Apartado Postal 6414, Ciudad de la Habana, Cuba. Email
darencibia@finlay.edu.cu | Rosario Fernández Luis Alfredo:
Centro de Química Biomolecular (CQB), Calle 200 y Avenida 21,
Atabey, Playa, Apartado Postal 16042, Ciudad de la Habana, Cuba.



Resumen

El conejo doméstico es un descendiente del conejo salvaje que habitaba en
el oeste de Europa y en el noroeste de África. En los estudios de toxicología
experimental se destaca su uso en la determinación de toxicidad por
irritación dérmica, ocular, toxicología de vacunas, además de ser básico
como modelo animal para determinar compuestos teratogénicos, los cuales
influyen tanto en la fertilidad de la hembra como en la del macho. Los
métodos para la valoración de la calidad del semen, tanto para la
inseminación artificial como en la investigación, están sufriendo un
constante desarrollo para intentar estimar con mayor precisión la fertilidad
de los machos. Desafortunadamente, las valoraciones de laboratorio no
predicen con exactitud la fertilidad y tampoco se obtiene una repetitividad
de unos análisis a otros, debido a la subjetividad de muchas de dichas
valoraciones. El objetivo de este trabajo es la confección de una guía
teórico-práctica que permita realizar estudios del semen en conejos de la
raza Nueva Zelanda Blanca, aplicado a la temática de toxicología de la
fertilidad. Trataremos los temas de inducción del celo en las hembras,
condiciones y método para la extracción del semen, pruebas macroscópicas
y microscópicas del semen, valoración del peso de órganos y examen
anatomopatológico. Todas las pruebas descritas aportan datos que nos
indicarán una disminución de la calidad del semen, pero debemos realizar
valoraciones que nos aporten sencillez, rapidez y que sean económicamente
viables; para ello cada investigador debe utilizar aquellas que mejor se
adapten a sus condiciones de trabajo.

Palabras clave: semen | fertilidad | conejo | pruebas microscópicas |
toxicidad.


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Consideraciones prácticas acerca de la calidad del semen de conejos aplicado en estudios de
toxicología de la fertilidad.
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Abstract

The domestic rabbit is descendend from the wilds rabbits was to inhabited
of western Europe and Northwestern Africa. The rabbits is very usefull in the
experimental Toxicology study, in dermal irritation, ocular irritation and the
vaccines Toxicology, beside is a basic animal models in teratogenicity
evaluation of the pharmaceutics products, that its influence in the female
and male fertility. The methods of semen quality valuation in artificial
insemination and research were suffering a constant development to
estimate with more precision the males fertility. Unfortunately, the
laboratory valuations don't predict with accuracy the fertility and not
obtained the repetitive of some analyses to other, because of the
subjectivity of many valuations. The objective of this work is the making of
a theoretical-practice guide that allows to carry out studies of the semen in
rabbits, (New Zealand White breed), applied to the fertility toxicology
thematic. We will treat the topics of the zeal induction in the females,
conditions and method for the semen extraction, macroscopic and
microscopic semen tests, organs weight valuation and anatomopatologic
exam. All the described tests contribute data that will indicate a decrease of
the semen quality, but we should carry out valuations that contribute
simplicity, speed and they are economically viable; the researcher should be
use the best option for his work conditions.

Key words: semen| fertility | rabbit | microscopic test | toxicity.



Introducción

El conejo doméstico es un descendiente del conejo salvaje que habitaba en
el oeste de Europa y en el noroeste de África. Está catalogado como uno de
los mamíferos de mayor utilidad en el mundo en todos los campos del
saber, dado por su gran prolificidad y adaptabilidad a diferentes condiciones
de manejo, salud, alimentación y condiciones ambientales en todos los
1 continentes. Se plantea que el conejo doméstico se asemeja a los roedores
en muchos aspectos.

En los estudios de toxicología experimental se destaca su uso en la
determinación de toxicidad dérmica, ocular además de ser básico como
modelo animal para determinar compuestos teratogénicos, que influyen
sobre todo en la fertilidad tanto en la hembra como en la del macho,
2participando en la formación del nuevo individuo, se conoce con gran
precisión el tiempo en que se realiza la maduración del ovocito,
implantación y bases sobre fertilización tanto en los parámetros fisiológicos
3 de la hembra como en el macho.

Los métodos para la valoración de la calidad del semen, tanto para la
inseminación artificial como a nivel de investigación, están sufriendo un
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constante desarrollo para intentar estimar con mayor precisión la fertilidad
de los machos reproductores. Desafortunadamente, las valoraciones de
laboratorio no predicen con exactitud la fertilidad y tampoco se obtiene una
repetitividad de unos análisis a otros, debido en gran parte a la subjetividad
4de muchas de dichas valoraciones.

La solución pasaría por superar esta subjetividad aumentando el número de
experimentos. Uno de los métodos ideales para analizar la capacidad
fecundante y/o fertilidad de un macho consiste en el estudio del semen,
5además de lógicamente la capacidad de producir gestaciones.
La obtención y valoración espermática ha de ser rápida y eficaz para poder
conservar la calidad y capacidad fecundante del semen durante cada una de
6 estas determinaciones.

Para lo cual nos trazamos como objetivo de nuestro trabajo la confección de
una guía teórico-práctica que permita realizar estudios del semen en
conejos, aplicados a la temática de fertilidad, para el uso en laboratorios de
toxicología experimental siendo esta una herramienta útil que ayude a la
valoración preclínica de nuevos productos y/o ingrediente activo en este
campo del saber.

Desarrollo

Antecedentes y Justificación del Estudio:

Para introducir un producto sea un fármaco, vacuna, fertilizante, en el
mercado es necesario cumplir con leyes y regulaciones, dentro de ellas se
destacan los estudios de Toxicología Experimental o como todos conocen los
estudios de “Toxicología Preclínica”. En el caso de productos naturales las
exigencias son aún mayores. Cuando este producto va a ser administrado a
embarazadas, mujeres y hombres en edad fértil por un prolongado periodo
de tiempo es necesario realizar estudios de Toxicología de la reproducción.
Estos estudios están divididos de una forma metodológica y dinámica en
tres segmentos (Fertilidad, Teratogénesis y Toxicidad peri-postnatal), así
7, 8como estudios multigeneracionales. Por lo general al presentar nuestros
resultados a las instituciones reguladoras la mayoría de los estudios de este
tipo van encaminados a determinar disfunciones en la hembra, solo
tomando al macho en el apareo, midiendo la libido sexual, número de
hembras preñadas etc. En ningún caso se hace alusión a la concentración
espermática, volumen, motilidad, morfoanomalías espermáticas, las cuales
de forma directa son determinantes de una gama de valoraciones a medir
en estos estudios, por mencionar algunas tenemos: el índice de fertilidad,
número crías, viabilidad de las crías, malformaciones del esqueleto y de
9 órganos entre otras.

Tal es el caso del Saw-Palmetto, producto natural que inhibe la Hiperplasia
Prostática Benigna, en el cual se utilizaron algunas de las valoraciones que
este trabajo propone para corroborar los resultados negativos obtenidos en
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esta rama, siendo de gran utilidad, pues les permitió tener una mayor
10-12valoración y nivel de confiabilidad de su producto. Por su parte el
Finasteride (Dutasteride), tras corroborar los problemas existentes de
afeminamiento, retardo en la bajada de los testículos y de la hendidura
prepucial en crías machos, así como valores ligeramente bajos de los índices
de fertilidad en ratas, se utilizó una variante de este estudio y se obtuvo
como resultado que el producto disminuye el volumen del eyaculado al ser
administrado a corto plazo, no se han realizado aún estudios a largo
13-18 plazo.

En materia de experiencia, le podremos comentar que este tipo de estudio
se está implementando en nuestro laboratorio a raíz de obtener extensos
resultados en la toxicología de la reproducción de un producto nuestro en
desarrollo en el cual se obtuvieron resultados en función de la toxicidad
reproductiva de la hembra y en el macho de forma indirecta, por cuanto las
autoridades regulatorias nos exigían algún tipo de estudio que manifestara
la no toxicidad reproductiva directa en el macho, destacar que los
resultados iban o no más haya de la integridad de los órganos sexuales
(análisis anatomopatológico), salud, libido etc.

Por ende este trabajo no se basa en la implementación de nuevas técnicas,
sino que el investigador en el campo de la toxicología experimental sepa
que estas herramientas existen y que pueden ser utilizadas para resolver de
forma inmediata un problema dado con metodologías que incluyen un bajo
costo, fácil reproducción y obtención rápida de los resultados, las cuales no
necesitan de equipos sofisticados ni de personal calificado en esta materia.
Para lo cual tomamos valoraciones que incluyen un análisis básico como son
las pruebas de rutinas que en este trabajo debatimos, pudiendo ser
desarrolladas por técnicos o especialistas en laboratorios con bajos
recursos.

Diseño experimental:

Para determinar la influencia en la fertilidad tras la administración en dosis
repetidas de un producto mediante la valoración o contrastación seminal de
conejos en toxicología experimental por lo general se forman 4 grupos
19experimentales de 8 a 10 conejos machos/grupo (32-40 total) , de 7-8
meses de edad (adultos) de 1,8-2,5 kg, para formar un grupo control de
vehículo y tres niveles del producto a evaluar. Se puede incluir o no un
grupo control positivo administrado con sustancias de referencia, el cual
puede ser administrado por dosis y vía diferente a la sustancia de ensayo.
Por lo general el método de extracción de semen mas usado es la falsa
monta con el uso de una coneja estrogenizada para lo cual se incluyen a
20 razón de 1 hembra para 6-8 machos.

Se administra la sustancia de ensayo durante 8 semanas (60 días por vía
oral, el cual abarca un ciclo espermático y ¼ del siguiente, en el conejo este
ciclo dura 48 días), durante los cuales debe pesar los animales
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semanalmente para determinar las dosis de producto a administrar y se
21observaran dos veces al día. Al cabo de las 8 semanas debe extraer el
semen con el uso de una coneja en celo para su valoración macroscópica y
microscópica. Para tener una mayor valoración de la toxicidad del producto
a evaluar en el sistema reproductivo del macho se deben sacrificar los
animales para realizar un estudio anatomopatológico de órganos y
cavidades, por último se extraen los órganos sexuales (testículos,
epidídimos, próstata y vesículas seminales) para su estudio histológico y la
22determinación de la relación peso de órgano/peso corporal. Todas las
variables analizadas se deben comparar contra el grupo control negativo.

Inducción del celo en las hembras:

Las Prostaglandinas induce la regresión del cuerpo lúteo, iniciando una
nueva ovulación. Su uso es recomendable ya que las hembras se
encontrarán receptivas a los dos días de su aplicación, para un nuevo
23 servicio.

Coneja estrogenizada. Entre los tratamientos hormonales que se utilizan
pre-monta se encuentra la PMSG, la cual genera un Pico de estrógeno que
mejora la receptividad-fertilidad y prolificidad, las dosis deben ser pequeñas
de 20 UI máximo por vía (subcutánea). Además para mejorar la aceptación
se debe bioestimular con un tratamiento de 16 horas de luz durante 8 días
24antes de la extracción del semen. La PMSG constituye una Gonadotropina
Coriónica extraída del suero de una yegua gestante.

Ejemplo de algunos esquemas de aplicación efectiva, utilizadas por nosotros
25durante evaluaciones previas a algunos de nuestros productos:
1.) Se aplica vía intramuscular o subcutánea 12-35 UI, 48 horas antes del
momento del servicio natural, la dosis de 35 suele ser más efectiva.
2.) Se aplica vía intramuscular 20 UI, 72 horas antes del momento del
servicio natural.

Condiciones para la extracción del semen:

Se utiliza una vagina artificial que consta de las siguientes partes:

- Tubo rígido de PVC.
- Goma-espuma.
- Globos comunes adaptados.
- Tubo colector graduado.

El cuerpo de la vagina (tubo de pvc) está recubierto en su interior por una
capa de goma-espuma. Dentro del cuerpo de la vagina se coloca el látex
formando una cámara aislada donde se coloca el agua caliente, de manera
tal que el agua nunca tome contacto con el semen. En el extremo posterior
del tubo rígido se coloca un tubo colector graduado para la recolección del
26semen. Como lubricante se utiliza vaselina.
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El volumen y la calidad del semen dependen de la camisa utilizada en la
vagina artificial, la cual debe estar seca y no se debe utilizar gel, además
hay que realizar un cuarto de vuelta del látex dentro de la vagina, pues los
pliegues que se forman permiten una estimulación al macho.

Se puede agregar 10-15 gramos de glicerol en el agua para mantener la
27temperatura de la misma en la vagina. Además se debe llenar con agua a
temperatura de 55-58º C y completar con una inyección de aire para
favorecer la presión. Se debe tener muy en cuenta la temperatura del agua
debido a que las vaginas artificiales con temperaturas de 50º C induce la
liberación de orina y a menos de 40º C el animal no salta o se incrementa el
volumen de gel y gránulos dificultando la manipulación del eyaculado y
28alterando su calidad dando resultados falsos positivos. Una vez completa
con agua y aire la vagina se deja en una estufa a 50º C hasta su uso. Antes
de la extracción se agrega a la vagina el tubo colector y se protege con un
tubo aislante de la luz y del frío.

Método para la extracción del semen:

En el momento de la extracción se lleva la hembra a la jaula del macho. Se
ubica la hembra en posición de servicio, cuando el macho intenta el salto se
coloca la vagina artificial por debajo del vientre de la coneja, de manera tal
que el pene del reproductor se introduzca en la vagina artificial.
La temperatura del agua de la vagina artificial debe ser tal, que llegue al
pene del macho a 40 / 42 ° C. Si se utiliza un látex muy grueso, resulta más
29aislante y se debe aumentar la temperatura del agua. La temperatura del
30agua es el desencadenante de la eyaculación en el macho. Una vez
terminado el salto, se observa en el tubo colector si el eyaculado presenta
tapón mucoso o gel, procedente de la secreción de las vesículas seminales
y de la próstata, debiéndose retirar.

El eyaculado se coloca en un tubo de centrífuga graduada dentro de un
termo a 30-36° C de temperatura, procediéndose luego a la valoración del
eyaculado de forma macroscópica y /ó microscópica. Otra forma es que al
extraerlo se debe ubicar en un recipiente en baño de maría a 37° C para
evitar choques térmicos.

1. Pruebas Macroscópicas:

- COLOR: Blanco nacarado normal, indica buena calidad seminal. Se deben
desechar los eyaculados que presenten una coloración grisácea, rojiza (con
sangre, por lesiones en el pene o uretra), marrón por contaminación con
heces fecales, amarillo por presencia de pus u orina con mal olor o con
31sedimentos anormales.
- ASPECTO: Se clasifica en uniforme los más deseados y no uniforme en
cuanto a la opacidad.
- OLOR: Suis generis, otra variante de olor se clasifica como mala.
32, 33 - PH: 6,0 -7,3 es normal otros plantean de 6,8-7,5. Por lo general a
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partir de valores de 7,2 comienza a disminuir la concentración, motilidad y
viabilidad del semen. Valores diferentes a estos, nos indican mala calidad
seminal. Se realiza con el uso de un pHmetro o papel de tornasol.
- VOLUMEN: Se determina mediante la graduación de los tubos colectores,
debe ser de 0,25-0,3 a 1-1,5 mL. Depende de la época del año los valores
34mas bajos de rango se obtienen en otoño y los más altos en primavera.
- CONSISTENCIA: La más deseada es líquida, que no sea acuoso. Para
realizar esta prueba homogenice en primera instancia la muestra de semen
lentamente, luego se toman 20 µL y se deja caer sobre una lámina
35portaobjeto gota a gota, para lo cual se dan las siguientes clasificaciones:
1. Gota a gota.
2. Forma de filamento.
3. Fluye como el agua.

2. Pruebas Microscópicas Fundamentales:

Las pruebas microscópicas siempre se deben realizar por dos observadores
independientes para luego establecer un promedio entre ambos resultados.

- CONCENTRACIÓN:

Esta valoración es muy importante, ya que existe una variabilidad grande de
unos eyaculados a otros. La concentración se puede calcular por varios
métodos, destacando la espectrofotometría y el uso de cámaras de recuento
36celular (Bürker, Neubauer, Thoma). La espectrofotometría (m=540nm)
mide la densidad óptica de la muestra (turbidez), lo que permite saber la
concentración llevando la lectura que obtengamos a una tabla de
conversión, donde están relacionados diferentes niveles de tramitancia con
diferentes concentraciones de espermatozoides, aunque en conejos este
método induce a error debido a la gran cantidad de impurezas que presenta
37el semen, por lo tanto no se recomienda su uso.

El método mas usado en las investigaciones y por nosotros es la valoración
de la concentración mediante Cámara de Neubauer o en forma subjetiva se
observa una gota de semen entre porta y cubreobjeto a 40-60 aumentos.
6La concentración en el semen oscila entre 50-250 x 10
espermatozoides/mL.

A continuación encontrara el procedimiento general de dos técnicas las
cuales de forma rápida le ayudaran a establecer la concentración de
espermatozoides que contiene el semen a evaluar:

Técnica 1: El conteo se realiza con ayuda de la cámara de Neubauer a una
dilución 1:100 utilizando como diluente la solución salina formolada, luego
se homogeniza con movimientos lentos de inversión del tubo, y se toma con
una pipeta Pasteur aproximadamente (10 µL), posterior a esto se deja
deslizar en la cámara. Después de reposar dos a cinco minutos se procede
38al conteo espermático.
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Solución salina formolada:
Para preparar 1 L de volumen final de esta solución debe mezclar, 9 g
de cloruro de sodio, con 3 mL de formol al 40 % y por ultimo añadir 1
000 mL de agua destilada.
Se cuenta los espermatozoides presentes en los cuatro cuadrantes,
con un total de 16 cuadros. El volumen ocupado por los 4 o 5 cuadros
a contar según el tipo de cámara multiplicado por la dilución origina
un factor de multiplicación.
Ejemplo: 16 + 18 + 12 + 20 = 66.
Factor de multiplicación: 4 x 100 x 10.
3 Concentración = 66 x 4 000 = 264 000 espermatozoides/mm o
6 30,264×10 espermatozoides/mm .
Esta técnica también permite calcular los espermatozoides totales por
eyaculado los cuales se obtienen con una simple multiplicación del
volumen por la concentración. En este caso es necesario unificar la
medida por lo que se debe multiplicar nuevamente por 1 000 para
llevar desde milímetros cúbicos de la concentración hasta mililitros de
39volumen.
Ej: Volumen de eyaculado: 1 mL.
3 Concentración: 264 000 /mm .
9 1 x 264 000 x 1 000 = 264 000 000 = 0,264 x 10
espermatozoides totales.

Técnica 2: En primera instancia se homogeniza la muestra con
movimientos lentos de inversión del tubo, luego se toma un tubo de 12x75
mm y se agrega 100 µL de semen + 900 µL de solución diluente, o
simplemente a una dilución 1:100. Posterior a esto mezcle con movimientos
lentos de inversión del tubo y monte en cámara de Neubauer, dejar
sedimentar por 5 minutos. Debe contar en el mm central de la cámara de
40 Neubauer.

Los espermatozoides contados se multiplican por 4 o 5 cuadros contados y
6 se dividen entre 10, se informa el número por 10 espermatozoides por mL.
6Ej: 15+10+20+24= 69 x 4/10= 27,6 x 10 espermatozoides/mL.

Preparación de la solución diluente: Tome 50 g de Bicarbonato de Sodio
y luego debe diluir con agua destilada hasta completar a 100 mL.

- ANOMALIAS:

Para determinar el número y tipo de formas anormales puede colorear o no
con eosina la muestra. Estos valores se cuentan en base a 100 y se
expresan lo resultados como (%).

Cabeza. Es ovalada, contiene cromatina altamente condensada (DNA). La
dotación cromosómica de ésta es haploide, es decir, sólo contiene la mitad
de los cromosomas que poseen las células somáticas del animal que son
4144.
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Acrosoma. Se encuentra en el extremo anterior de la cabeza del
espermatozoide, es un saco membranoso que contiene ciertas enzimas,
como la acrosina y la hialuronidasa, que se encargan de disolver la zona
42pelúcida del ovocito para permitir la fecundación.
Tracto intermedio. Está delimitado en su parte anterior por el cuello y en la
posterior por el anillo. Podría definirse su función como el motor del
43espermatozoide, el que produce el movimiento.
Cola. Es aquella parte que lleva a cabo el movimiento.
Las anomalías morfológicas pueden afectar a cualquiera de las tres partes
del espermatozoide: cabeza, tracto intermedio y cola, generando
44 alteraciones que van a dificultar la fecundación.

Se coloca una gota en un portaobjeto y se observa sobre todo:

1. En la cabeza, están los normales y anormales que incluye
(macrocabeza, microcabeza, cabeza doble y cabeza suelta).
2. En el Cuello, anillo o porción intermedia, están los normales y
anormales los cuales incluye (enroscado, doble, engrosado y excéntrico).
3. En la Cola, están los normales y anormales los cuales incluye (en
ovillo, látigo, dobles y flexionadas).

De colorearse la muestra se tomaran 0,1 mL de semen y se mezclara con 3
mL de cloruro de sodio al 0,9%, luego se homogenizara con movimientos
lentos de inversión del tubo mecánicamente y se adicionara de 3 a 7 gotas
de eosina Y al 1%, dejándose actuar por 5 minutos, luego se extiende o se
coloca una gota en un portaobjeto siendo tapada con un cubreobjeto,
secándose los bordes de la lámina. Se aceptan valores de 10 a 15 %, los
cuales no son importantes, otros autores plantean que de un 20-30% de
45anomalías totales es aceptado.

- MOTILIDAD:

La motilidad es una característica de la célula espermática y se trata de uno
de los parámetros más importantes en las contrastaciones seminales,
debido a que es imprescindible para que se produzca la fecundación. Existen
varias técnicas de estudio de la motilidad, pero la más utilizada y a la vez,
la más simple, es la valoración visual del porcentaje de espermatozoides
46móviles y la calidad de su movimiento.

Los espermatozoides pueden presentar dos tipos de movimiento,
movimientos de rotación (alrededor de su eje) y/o movimientos progresivos
(desplazamiento de la célula), por lo general lo realizan de forma lineal,
pero en ocasiones es circular.

Para la realización de esta valoración todo el material usado debe estar en
47condiciones de normocinesis (temperatura de 37°C).

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Motilidad Masal: Se depositan de 7 a 10 µL en un portaobjeto atemperado
(tanto los portaobjetos como las puntas deben estar a 37 º C), y se
observa a 40 aumentos, se valora la velocidad con la que se mueven los
remolinos de la superficie de la gota valorándose en una escala de
48puntuación de 0-5.
- Nada (0), Temblor en el lugar (1), Inicio de ondas van y vienen, es malo
aún (2), Regular con ondas lentas (3), Buena con ondas rápidas (4) y por
ultimo Muy buena con remolinos o tornados (5).

Para que su valoración sea buena el 60-70% de los animales examinados
deben estar entre 4 y 5. Se debe estimar los resultados como porcentaje, es
fundamental establecer un promedio entre el número de animales a utilizar
por dosis.

Motilidad Individual: Diluir el semen con algún diluente seminal sobre
todo suero fisiológico a 37 º C (cloruro de sodio al 0.9%), para lo cual tome
100 µL de semen para 900 µL de esta solución, luego se homogeniza con
movimientos lentos de inversión del tubo y con una pipeta procedemos a
colocar una gota en un portaobjeto, luego se coloca un cubreobjeto y se
observa al microscopio óptico (todos los útiles deben estar atemperados a
37 º C).

En primer lugar se evalúa el % de espermatozoides con motilidad sin tener
49 en cuenta su movimiento.

Luego debe evaluar el tipo de movimiento (progresivo, rectilíneo y
uniforme) en una escala del 1 al 5.

(5) Muy Buena (>95%), (4) Buena (80-95%), (3) Regular (70-80%), (2)
50Mala (60-70%), Nula o Muy Mala (< 60%). Todo el material debe estar en
condiciones de normocinesis, a temperatura de 37 º C.

- VIABILIDAD:

La relación de vivos / muertos es otro parámetro importante. Un
espermatozoide muerto libera enzimas entre las que se encuentran las del
acrosoma, que van a producir daños en las membranas de los vivos, lo que
provocará un mayor numero de espermatozoides dañados y la consiguiente
51pérdida de calidad de las dosis seminales. Para determinar este cociente
se utiliza generalmente una serie de tinciones, entre ellas la de
Eosina52Nigrosina, Yoduro de propidio o la de Tripán azul. Todas estas técnicas se
basan en la capacidad del espermatozoide para evitar la incorporación de
determinados colorantes a su interior, debido al efecto barrera que realiza
su membrana citoplasmática.
La viabilidad en los casos de fertilidad se plantea que debe ser medida
dentro de 30 minutos posterior a la extracción, destacándose grandes
53pérdidas posteriores al mismo. Para lo cual se adicionan 5 gotas de eosina
Y al 1% o simplemente utilice el homogenato que quedo en la prueba de
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