Comparación entre líneas de ratones en el ensayo de aberraciones cromosómicas en médula ósea

Daniel

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Objetivo. El objetivo de este trabajo fue comparar los índices espontáneos e inducidos en ratones de ambos sexos de las líneas Balb/c, NMRI, OF-1 y C57BL/6/cenp, mediante el ensayo de aberraciones cromosómicas en células de la médula ósea. Materiales y métodos. Con este fin se determinó la línea más eficiente, sobre la base de la aparición significativa de índices espontáneos más bajos e índices inducidos altos a sustancias mutagénicas como la ciclofosfamida (CF). Resultados. Se obtuvo como resultado que la línea Balb/c en ambos sexos difiere significativamente de las demás líneas evaluadas. En esta línea se encontró el menor número de células totales con aberraciones estructurales y un mayor número de inducción de aberraciones cromosómicas cuando es utilizada la CF como mutágeno. Conclusiones. Este trabajo permitirá utilizar la mejor línea de ratones como biomodelo en este ensayo de genotoxicidad, además que le confiere a esta técnica citogenética mayor veracidad y robustez.

Sujets

• Médula ósea
• Raton

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• Publié le: 01 janvier 2012
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Rev.MVZ Córdoba 17(2):2957-2963, 2012. 2957
ORIGINAL
Comparación entre líneas de ratones en el ensayo de
aberraciones cromosómicas en médula ósea
Comparison between mice lines in bone marrow chromosomal
aberrations testing
1 2 3Daniel Arencibia A, * Ms.C, Luis Rosario F, Ms.C, Alexis Vidal N, Ph.D.
1 2Instituto Finlay, Vicepresidencia de Investigaciones, Habana, Cuba. Instituto de Farmacia y
3Alimentos (IFAL, U.H), Habana, Cuba. Facultad de Biología (U.H), Habana, Cuba. *Correspondencia:
[e-mail]
Recibido: Agosto de 2011; Aceptado: Febrero de 2012.
RESUMEN
Objetivo. El objetivo de este trabajo fue comparar los índices espontáneos e inducidos en ratones de
ambos sexos de las líneas Balb/c, NMRI, OF-1 y C57BL/6/cenp, mediante el ensayo de aberraciones
cromosómicas en células de la médula ósea. Materiales y métodos. Con este fn se determinó la línea
más efciente, sobre la base de la aparición signifcativa de índices espontáneos más bajos e índices
inducidos altos a sustancias mutagénicas como la ciclofosfamida (CF). Resultados. Se obtuvo como
resultado que la línea Balb/c en ambos sexos difere signifcativamente de las demás líneas evaluadas.
En esta línea se encontró el menor número de células totales con aberraciones estructurales y un
mayor número de inducción de aberraciones cromosómicas cuando es utilizada la CF como mutágeno.
Conclusiones. Este trabajo permitirá utilizar la mejor línea de ratones como biomodelo en este ensayo
de genotoxicidad, además que le confere a esta técnica citogenética mayor veracidad y robustez.
Palabras clave: Aberraciones cromosómicas, médula ósea, ratón (Fuente: AIMS).
ABSTRACT
Objective. The aim of this study was to compare spontaneous and induced rates in mice of both
sexes of lines BALB / c, NMRI, OF-1 and C57BL/6/ cenp, by testing chromosomal aberrations in bone
marrow cells. Materials and methods. For this purpose, the most effcient line was determined,
based on the signifcant appearance of lower spontaneous rates and higher induced rates to mutagen
substances such as cyclophosphamide (CP). Results. The result obtained was that line Balb / c, in
both sexes, differs signifcantly from the other lines tested. The lesser total number of cells with
structural aberrations was found in this line and a greater number of induction of chromosomal
aberrations when CP was used as a mutagen. Conclusions. This work will give way to the use of the
best line of mice as bio model in this genotoxicity test, and will also give this cytogenetic technique
greater veracity and robustness.
Key words: Bone marrow, Chromosomal aberrations, mice (Source: AIMS).

29572958 REVISTA MVZ CÓRDOBA • Volumen 17(2), Mayo - Agosto 2012
INTRODUCCIÓN la evolución positiva o negativa de un nuevo
producto es necesario buscar el biomodelo
animal ideal (3).Por lo general los estudios mutagénicos y
genotóxicos en la toxicología experimental,
El objetivo de este trabajo fue comparar los se realizan cuando ya se han agotado todos
los estudios de toxicidad aguda potencial del índices espontáneos e inducidos en ratones
de ambos sexos de las líneas Balb/c, NMRI, producto a evaluar en dos especies y por al
OF-1 y C57BL/6/cenp, mediante el ensayo menos dos vías (1). Dentro de esta batería
de aberraciones cromosómicas en células de ensayos se encuentra el de aberraciones
de la médula ósea para determinar la línea cromosómicas. Esta técnica citogenética in
vivo es a corto plazo, de gran sensibilidad y útil más efciente, sobre la base de la aparición
signifcativa de índices espontáneos más bajos e para detectar fundamentalmente aberraciones
índices inducidos altos a sustancias mutagénicas cromosómicas estructurales.
como la CF.
Con los mutágenos químicos, la mayor parte
de las aberraciones inducidas son de tipo
cromatídico. En este método, se utilizan células MATERIALES Y MÉTODOS
de médula ósea de mamíferos expuestos, por
vías apropiadas, a las sustancias de ensayo Animales. Se utilizaron ratones de ambos sexos
y sacrifcados a intervalos sucesivos (2). El adultos jóvenes (6-7 semanas), de las líneas
tejido diana es la médula ósea por estar más Balb/c, NMRI, OF-1 y C57BL/6/cenp. El peso
vascularizado y por contener una población de corporal de los animales osciló entre 25 y 30 g al
células de ciclo muy corto las cuales pueden término de la cuarentena, donde se mantuvieron
aislarse y tratarse con facilidad (2). en condiciones controladas: temperatura
(25±2ºC), humedad relativa (60%±10%) y
Como controles positivo se utilizan sustancias ciclos de luz-oscuridad de 12 h. El acceso al agua
mutagénicamente activas, con mecanismos y al alimento (pienso estándar para esta especie
de mutación conocida, dentro de estas la suministrado por el CENPALAB), fue ad libitum.
más difundida ha sido la ciclofosfamida (CF), Estas características fueron comunes para todos
caracterizada como un clastógeno químico los grupos experimentales evaluados en este
potente (1,2). Las sustancias utilizadas ensayo. Toda la manipulación de los animales
como controles positivos en los estudios de se realizó de acuerdo con los principios éticos
genotoxicidad in vivo se pueden administrar por internacionales para el uso de los animales de
vía y dosis diferentes al producto farmacéutico Laboratorios CCAC (4).
en investigación (2).
Procedimientos éticos. Los autores
Por otro lado se plantea que durante las declaramos que este trabajo fue confeccionado
investigaciones de un mismo producto a sobre la base de buenas prácticas de laboratorio
evaluar mediante el tamizaje genotoxicológico preclínico presentes en el reglamento nacional
se utilizan diferentes líneas sin tener en cuenta, de aprobación de protocolos de investigación de
la más efciente para detectar daño en el ADN. la República de Cuba. Además se declara por
Además de que las líneas de ratones producidas parte de los autores del artículo que al comenzar
en Cuba hasta el momento no habían sido esta investigación se obtuvo por escrito el
evaluadas y/o exploradas teniendo en cuenta consentimiento de aprobación del protocolo
su efciencia genética para detectar sustancias e informe por el comité institucional de ética
con baja, media o alta genotoxicidad. Además para la experimentación animal de nuestra
el estudio profundo de nuestros biomodelos institución.
permitirá utilizar el mínimo de animales y obtener
resultados fables; por lo que disminuirán las Grupos experimentales. En todos los grupos
repeticiones de estos estudios tan costosos y experimentales, la sustancia se administró
engorrosos. en el horario de 10:30-11:30 a.m, y las
concentraciones a administrar de cada sustancia
Para la evaluación de nuevos productos es se ajustaron semanalmente en función del
necesario conocer la frecuencia espontánea aumento del peso corporal. Los animales se
e inducida de aparición de cada uno de los distribuyeron aleatoriamente (10 ratones/
fenómenos que estudia la toxicología genética grupo/sexo).
en el biomodelo a utilizar. Esto permitiría conocer
nuevas sustancias con potencial genotóxico, En el grupo experimental 1 se utilizaron animales
así como la medida en que se manifesta. Por no tratados, a los cuales se les realizó la técnica
otro lado al ser estas pruebas tan decisivas en de entubación gástrica durante 14 días. Arencibia - Comparación de índices espontáneos e inducidos en ratones 2959
En el grupo experimental 2 se utilizó Tween® (2,7). Se contabilizaron 100 metafases por
65 al 2%, vehículo utilizado en la mayoría de animal, determinándose el número de células
las preparaciones de sustancias oleosas, útil con aberraciones (rupturas e intercambios
como agente tensoactivo (5). Este producto cromosómicos y cromatídicos) y frecuencia
fue adquirido de la frma AppliChem con CMC de gaps. También se calculó el índice mitótico
(25°C)=5.9x105 mol/L y solubilidad (25°C) de IM% (porcentaje de metafases en 1000 células
100g/L en H2O y número de lote 9B006892. En leíbles) y el número de células con poliploidía en
el grupo experimental 3 se utilizó NaCl al 0.9% 1000 células leíbles, todas las determinaciones
como segundo grupo solvente, ya que está fueron leídas por dos observadores, para luego
demostrado que el mismo es el disolvente de la establecer un promedio entre ambas (2,7).
mayoría de las sustancias hidrofílicas a preparar
(6). Este solvente fue adquirido de la frma Eutanasia. A todos los animales se les practicó
BDH (BDC) con un 99% de pureza y número la eutanasia por dislo